Avaliação da viabilidade celular e perfil de citocinas de linfócitos sanguíneos e esplênicos de ratos sépticos submetidos ao tratamento in vitro com taurina e cloramina taurina

Abstract

Estudos estão buscando mecanismos de morte celular durante o curso da sepse, em que respostas pró-inflamatórias e anti-inflamatórias estão envolvidas na sua complexa fisiopatologia. Taurina (Tau) é um aminoácido abundante em polimorfomucleares (PMNs) que reage com ácido hipocloroso para formar o oxidante cloramina taurina (TauCl) em condições inflamatórias. Neste contexto, foi investigado potenciais interações entre linfócitos e TauCl em ratos submetidos à ligação e perfuração cecal (CLP), por meio de análise de viabilidade celular e perfil de secreção de citocinas (TNF-α, IFN-γ, IL-6, IL-17A, IL-23 e IL-10). Ratos adultos machos foram divididos em dois grupos (sham e CLP) e subsequentemente mortos 24 ou 120 horas após a indução da sepse para isolamento de linfócitos do sangue e do baço. Linfócitos (> 95,0% de pureza determinada por diferenciação com coloração de Giemsa) foram cultivados por 24 horas a uma concentração de 1x106 células/mL e ativadas com 2 μg/mL de concanavalina A (ConA). Após 24 horas, Tau e TauCl foram adicionadas a concentrações de 0,1, 0,2, 0,3, 0,4 e 0,5 (mM) por uma hora. Após este tempo, as células foram incubadas com MTT (500 μg/mL) por 3 horas para avaliar viabilidade celular e os sobrenatantes foram usados para determinar os níveis de citocinas. Células incubadas com Tau exibiram maior viabilidade do que as células incubadas com TauCl, em ambos tempos e órgãos. TauCl, por meio de relação dose-dependente, diminuiu a secreção de citocinas (TNF-α, IFN-γ, IL-6, IL-17A, IL-23 e IL-10) quando comparadas às células não incubadas. Estes achados mostram um possível comprometimento na função de linfócitos promovido pelo efeito de TauCl, correlacionado com a imunossupressão e morte celular características dos estágios de sepse.

Studies are researching immune cell death mechanisms during the course of sepsis in response to pro-inflammatory and anti-inflammatory mediators that are involved in its pathophysiology. Taurine (Tau) is an abundant amino acid in polymorponuclear leucocytes (PMN) that reacts with hypochlorous acid to form taurine chloramine (TauCl) under inflammatory conditions. In this context, we investigated potential interactions between lymphocytes and TauCl in rats submitted to cecal ligation and perforation (CLP), analyzing cell viability and cytokine secretion profile (TNF-α, IFN-γ, IL-6, IL-17A, IL-23 and IL-10). Adult male rats were divided in two groups (sham and CLP) and then were killed 24 or 120 hours after sepsis induction to isolate lymphocytes from blood and spleen. Lymphocytes (> 95,0% purity determined by differentiation with Giemsa staining) were cultured for 24 hours at a concentration of 1x106 cells/mL and activated by 2 μg/mL concanavalin A (Con-A). After 24 hours, Tau and TauCl were added at concentrations of 0.1, 0.2, 0.3, 0.4 and 0.5 (mM) for 1 hour. After this time, cells were incubated with MTT (500 μg/mL) for 3 hours to evaluate cell viability and supernatants were used to determine cytokines levels. Cells incubated with Tau exhibited better viability than those incubated with TauCl, in both time and organs. TauCl, in a time and dose-dependent ratio, decreased cytokines secretion (TNF-α, IFN-γ, IL-6, IL-17A, IL-23 and IL-10) when compared to untreated cells. These findings show a possible impairment in lymphocytes function promoted by TauCl, correlated with immunosuppression and cell death characteristic of the late stages of sepsis.