Desenvolvimento de um sorodiagnóstico para Sífilis a partir de epítopos de proteínas da Treponema pallidum

Abstract

A sífilis é uma infecção sexualmente transmissível bacteriana tendo como agente etiológico a Treponema pallidum. Atualmente é um problema de saúde pública, sendo que em certas regiões do mundo a prevalência tem aumentado significativamente. Em 2023, o Brasil registrou 242.826 casos de sífilis adquirida, com uma taxa de detecção de 113,8 casos por 100.000 habitantes. Apesar dos avanços na prevenção e no tratamento, a falta de diagnóstico precoce e a continuidade do tratamento ainda são barreiras significativas. A sífilis apresenta quatro estágios, sendo eles, o primário, secundário, latente e terciário ou também chamado de forma tardia. O diagnóstico é bastante complexo, realizado com base na história clínica, exame físico, semiologia e testes laboratoriais complementares, os quais consistem nos testes treponêmicos e não treponêmicos. Contudo, os atuais exames laboratoriais confirmatórios são muitas vezes ineficazes, gerando falso-resultados bem como levando a imprecisão do diagnóstico das fases da sífilis. Neste contexto, este trabalho propôs o desenvolvimento de uma plataforma de teste sorológico, ultrassensível, baseado em peptídeos de epítopos específicos provenientes de proteínas imuno dominantes altamente antigênicas e imunogênicas. Os participantes foram amostrados por meio de um estudo transversal. Assim, o perfil epidemiológico dos participantes foi determinado. O estudo transversal de acurácia diagnóstica foi executado avaliado a acurácia, sensibilidade, especificidade e valores preditivos do teste índice como uma ferramenta de vigilância para exposição à sífilis. Este estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa em Seres Humanos da Universidade de Rio Verde – Goiás/UNIRV sob o número de protocolo CAAE: 59241322.0.0000.5077. Os epítopos das cinco proteínas de antígenos imunodominantes Tp0171 (Tp15), Tp0435 (Tp17), Tp0574 (Tp47), Tp0684 e Tp0453 foram desenhados por ferramentas de bioinformática e peptídeos miméticos destes epítopos foram sintetizados quimicamente. Foram utilizados cinco peptídeos como antígenos em ELISA contra amostras de soro de sífilis positiva ou não infetados (n=84). Após, os peptídeos de melhor performance diagnóstica foram utilizados para monitorizar a eficácia do tratamento da sífilis (n=122). Entre os peptídeos avaliados para o diagnóstico, o CETp0435 apresentou um desempenho de diagnóstico superior, alcançando 100% de sensibilidade e especificidade com elevada acurácia. Os peptídeos CETp0171 e CETp0574 demonstraram um elevado desempenho de diagnóstico, com sensibilidade superior a 83% e especificidade superior a 90%. Os peptídeos CETp0684 e CETp0453 apresentaram uma sensibilidade superior a 80% e 90%, respetivamente, no entanto, o CETp0453 apresentou uma especificidade reduzida (~66%). Os peptídeos CETp0435 e CETp0171 demonstraram uma elevada acurácia de diagnóstico em todos os estágios da sífilis, com uma sensibilidade superior a 83% e uma especificidade superior a 97%. O CETp0435 alcançou 100% de sensibilidade e especificidade nos estágios primário, secundário e latente, enquanto o CETp0171 demonstrou um excelente desempenho na sífilis secundária e elevada acurácia nos estágios primário e latente. Após, os peptídeos CETp0435 e CETp0171 foram efetivos no monitoramento da eficácia do tratamento da sífilis, como evidenciado pelo declínio significativo dos níveis de anticorpos nos soros após o tratamento, apoiando o seu potencial como biomarcadores para avaliar a eficácia terapêutica. Ao final deste estudo obteve-se dois peptídeos, CETp0435 e CETp0171, como antígenos vantajosos para o sorodiagnóstico e o monitoramento do tratamento. A predição de epítopos via bioinformática permitiu o desenvolvimento de plataformas ELISA que oferecem ferramentas promissoras para uma melhor deteção da sífilis além de alternativa de teste treponêmico no monitoramento da abordagem terapêutica para sífilis, atualmente avaliada somente por testes não treponêmicos.